体外偶联UDP-糖基转移酶与蔗糖合成酶
高效催化合成莱鲍迪苷A
朱清娟
陈美琪
梁书利
王登刚
林影
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100065.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 510006
摘要：本研究构建了UDP-糖基转移酶UGT76G1基因的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-UGT76G1和绿豆来源的蔗糖合成酶(mbSUS)基因的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K/pPICZA-mbSUS.通过甲醇诱导产酶,制备UDP-糖基转移酶UGT76G1和蔗糖合成酶,并构建生物催化级联反应体系,生物催化甜菊糖苷(Stevioside,ST)合成莱鲍迪苷A(rebaudioside A,RA),有效实现了级联反应体系中尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)的循环利用.本研究通过反应条件优化,发现级联反应中的限速酶是糖基转移酶UGT76G1,添加酶活比例为U(UGT76G1):U(mbSUS)=6:1为合成莱鲍迪苷A的最佳酶活比例,在pH 7.0,UDP浓度1 mM,蔗糖浓度50 mM,MgCl2浓度3 mM的反应条件下,10 mM ST转化合成8.20±0.11 mM RA,RA的产率达到82.91％,与在大肠杆菌表达系统中相比,极大缩短了催化反应时间.利用体外偶联UDP-糖基转移酶与蔗糖合成酶催化合成RA为酶法高效生物合成RA及其产业化应用提供技术支持.
关键词：UDP-葡糖基转移酶蔗糖合成酶毕赤酵母莱鲍迪苷A
资助基金：国家重点研发计划(2018YFA0901700)国家自然科学基金(31871739)
论文发表日期：2021-01-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 47-53,64 )
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