CRISPR/Cas9介导的果糖低消耗酿酒酵母工程菌的构建
陈红
赵风光
李战胜
杨家明
韩双艳
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 5100065.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 510006
摘要：利用酿酒酵母为宿主,以果糖为原料合成D-阿洛酮糖具有食品方面的先天优势.为了减少酿酒酵母宿主本身对果糖的消耗,对酿酒酵母的己糖激酶同工酶2(Hexokinase isoenzyme 2,hxk2)基因进行编辑.本研究采用CRISPR/Cas9技术,构建了Cas9和gRNA共表达质粒pYES2-CG-Δhxk2,以酿酒酵母BY4741为出发菌株,URA3为筛选标记,采用高效电击转化法和胞内同源重组技术,获得hxk2基因缺陷株BY4741-Δhxk2.在此基础上,进行果糖发酵实验以评估突变菌株的果糖消耗速率.实验结果显示,发酵培养14 h时,缺陷株BY4741-Δhxk2果糖消耗速率为3.35 mg/h;与野生型菌株相比其下降了6.42％.此外,发酵培养22 h,BY4741-Δhxk2的OD600nm值为8.65,相比于野生型提高了6.40％.研究表明,己糖激酶hxk2基因的缺陷编辑可以一定程度降低酿酒酵母对果糖的利用,同时缺陷株较野生型表现出一定的生长优势,这为后续以酿酒酵母为宿主生产D-阿洛酮糖奠定了初步基础.
关键词：CRISPR/Cas9酿酒酵母己糖激酶同工酶2果糖
资助基金：广东省重点领域研发计划项目(2020B020226007)
论文发表日期：2021-02-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 72-78,27 )
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