屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性
杨玲双1
谢新强2
李滢2
张菊梅2
丁郁2
吴清平2
王涓3
1.华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省科学院微生物研究所,广东省微生物安全与健康重点实验室,华南应用微生物国家重点实验室,广东广州 5100752.广东省科学院微生物研究所,广东省微生物安全与健康重点实验室,华南应用微生物国家重点实验室,广东广州 5100753.华南农业大学食品学院,广东广州 510642
摘要：该研究旨在探究降胆固醇潜在菌株屎肠球菌132胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的活性,通过PCR技术克隆目的基因并在大肠杆菌BL21中表达,同时探讨其酶学特性.利用茚三酮法对其菌体破碎液BSH活性进行测定,比酶活达0.55 U/mg.通过克隆其目的基因,连接pET-28a(+)的表达载体并进行异源表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验显示,该酶分子量约37 ku.当底物为甘氨胆酸钠(glycocholic acid,GCA)、pH 5.50时,BSH酶活达4.93 U/mg.酶学特性结果表明,GCA为底物、pH 5.50、温度为30℃时达最适条件,BSH水解能力最强,酶活达6.59 U/mg,温度在4～30℃时,pH为5～7有较好的热稳定和pH稳定性.不同离子对酶活的影响实验表明Na+、Ca2+、Mg2+均对酶活有激活作用;Mn2+、Fe2+对酶活影响不大,但Ni2+、Al3+、Li2+、Co2+、Zn2+均对酶活有强抑制作用,比酶活降到10％以下,几乎丧失活性.通过酶反应动力学得出该酶的Vmax为6.44μmol/(min·mg),Km值为3.16 mmol/L.因此,通过bsh基因克隆并异源表达,提高了屎肠球菌132BSH活性,并且BSH水解各类胆盐能力较强,为降胆固醇功能食品的开发与应用奠定基础.
关键词：屎肠球菌132胆盐水解酶基因克隆异源表达酶学特性
资助基金：广东省重点研发计划项目(2018B020205002)广东省科技厅项目(2019QN01N107)广东省科学院科技发展创新驱动发展能力建设项目(2020GDASYL-20200301002)广东省重点实验室(2020B121201009)
论文发表日期：2022-08-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 35-43 )
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