人源川型胶原蛋白在毕赤酵母中的多拷贝重组表达、鉴定及抗氧化活性分析
蔡思泽
王斌
华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州510006
摘要：胶原蛋白在人体内有重要作用,并且在食品、保健品、医疗等方面有广泛应用.该研究针对毕赤酵母的密码子偏好性对人源Ⅲ型胶原蛋白基因进行了密码子优化,在此基础上构建了人源Ⅲ型胶原蛋白单串联、二串联和二串联四拷贝表达载体pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2和pPIC9K-COL3-4,转化毕赤酵母GS115实现了人源Ⅲ型胶原蛋白的整合表达,获得了胶原蛋白单串联、胶原蛋白二串联和胶原蛋白二串联四拷贝的毕赤酵母工程菌株.对pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2重组菌株进行了摇瓶模拟高密度发酵,甲醇诱导浓度为0.5％,经SDS-PAGE和Western Blot检测,重组菌株成功表达了重组胶原蛋白,其中单串联蛋白表观分子量约为26.7 ku,双串联蛋白表观分子量约为52.3 ku.四拷贝重组菌株在0.5％甲醇诱导下的高密度摇瓶发酵产量最高,在最佳诱导时间为72 h时,蛋白产量达到约0.45 g/L.通过镍柱纯化后获得高纯度重组蛋白,抗氧化活性实验表明,重组胶原蛋白DPPH自由基清除率达到51.49％、ABTS自由基清除率达到41.24％,证明具有抗氧化活性,为其在食品,保健品和医疗领域的应用提供理论依据.
关键词：胶原蛋白毕赤酵母重组表达抗氧化
资助基金：广东省自然科学基金资助项目(2022A1515010291)
论文发表日期：2023-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 129-137 )
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