易错PCR技术改造β-环糊精葡萄糖基转移酶的催化特性
郑婉1
刘振杨1
郑金珠1
武国干2
吴华伟1
1.长江大学生命科学学院,湖北荆州 4340252.上海市农业科学院,上海 200000
摘要：β-环糊精是一种环状多糖,可用于改变某些大分子化合物的理化性质,在食品、生物及医药等领域都具有很高的工业应用前景.通过利用β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase),使其作用于淀粉等含有葡萄糖基的多糖化合物,可转化生成β-环糊精.该研究采用易错PCR技术对来源于Paenibacillus campinasensis的β-CGTase进行定向进化,得到酶活力高的突变体,并对突变体进行镍柱亲和纯化与酶学性质分析.实验最终获得了一株突变体Q280L,其酶活力与原始β-CGTase相比提高了42.10％,对β-环糊精的转化率提高了7.60％,最适反应pH值和稳定性均有所变化,底物亲和力提高46.13％.经序列比对及结构分析,发现突变体Q280L与野生β-CGTase相比,第280位氨基酸残基种类以及周围氢键发生变化.该试验结果表明,基于易错PCR技术对β-CGTase基因进行定向进化,可提高酶活力和改善酶学性质,为实现β-环糊精的工业生产提供参考意义.
关键词：Paenibacillus campinasensisβ-CGTase定向进化易错PCR酶学性质
资助基金：国家自然科学基金(21576110)江苏省益生制剂重点建设实验室开放课题(JSYSZJ2017001)
论文发表日期：2023-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 25-31 )
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