腺苷酸环化酶在大肠杆菌中的表达及初步应用
宋捷
郑穗平
华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州 510006
摘要：腺苷酸环化酶(Adenylate Cyclase,AC)对酶法合成环单磷酸腺苷(Cyclic Adenosine Monophosphate,cAMP)至关重要,它催化三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)生成cAMP和焦磷酸(PPi).本研究将Thermomonospora echinospora来源的AC(TeAC)在大肠杆菌中进行异源表达,经过亲和层析纯化蛋白后进行酶学性质的分析,并进一步将其用于cAMP的催化合成.在 16℃下诱导重组大肠杆菌表达TeAC后,利用Ni柱亲和层析纯化TeAC,经过SDS-PAGE分析表明目的蛋白条带为40 ku,与预期蛋白大小一致.重组TeAC酶的最适温度为50℃,最适pH值为10.5.经酶动力学分析,测得该酶对底物ATP催化的动力学参数米氏常数(Km)=115.1 mmol/L,最大反应速度(Vmax)=64.52 μmol/(mg·min),催化常数(Kcat)=8.13 s-1.用TeAC催化底物ATP反应 11 h后cAMP产量可达 19.1 g/L.该研究成功表达了一种具有高效催化性能的TeAC,并将其应用于cAMP的催化合成时有较高的产量和生产效率,为酶法合成cAMP的应用研究奠定了基础.
关键词：腺苷酸环化酶环单磷酸腺苷大肠杆菌
资助基金：国家重点研发计划(2018YFA0901700)
论文发表日期：2024-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 65-73 )
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