哈茨木霉酸性蛋白酶基因的克隆表达及其水解应用
陈宇琛1
杨李2
谷敏2
陈凯欣2
胡秋怡2
邱小娴2
彭靖怡2
柯野2
1.韶关学院生物与农业学院,广东韶关 512005;仲恺农业工程学院资源与环境学院,广东广州 5102252.韶关学院生物与农业学院,广东韶关 512005
摘要：为了对哈茨木霉酸性蛋白酶(Acid Protease,Ap)的性质研究,采用RT-PCR克隆了哈茨木霉Ap基因,转化至毕赤酵母GS115 菌株中获得高效表达,然后对该重组蛋白酶(Recombinant Acid Protease,rAp)的酶学性质和水解大豆分离蛋白的效果进行测定.结果表明,重组毕赤酵母在500 mL三角瓶中诱导表达时,发酵液中rAp酶活力达到21.50 U/mL.该rAp为天冬氨酸蛋白酶,最适温度为55℃,在40℃处理120 min仍具有较强的热稳定性;最适pH值为 2.50,在不同pH缓冲液中处理 24 h后,pH值 2.00～5.00 具有较强稳定性.Cu2+、Ni2+和Mn2+能显著促进活性,相对酶活分别高达116.21%、113.79%和117.44%;而Fe2+、Fe3+、0.50%SDS和5.00%Trion X-100显著抑制活性,其相对酶活分别 78.02%、79.26%、2.6%和 13.19%.rAp和胃蛋白酶对大豆分离蛋白水解后,水解产物中蛋白相对含量分别为14.67%和3.64%,β-伴大豆球蛋白抗原性分别降低了30.01%和26.10%,球蛋白抗原性分别降低了 22.37%和 15.63%.从以上结果可知,rAp对大豆分离蛋白具有较强水解和降低抗原性的能力,具有潜在的应用开发价值.
关键词：哈茨木霉酸性蛋白酶酶学性质大豆分离蛋白水解作用
资助基金：广东省自然科学基金(2018A0303130108)韶关学院大学生创新创业训练计划国家级项目(202210576016)广东大学生科技创新培育专项资金资助项目(pdjh2023b0474)
论文发表日期：2024-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 84-91 )
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