LfcinB与EGFP融合蛋白在毕赤酵母中的胞内表达与分离纯化
刘威1
王玉莲1
王林2
吴昊东1
田会敏1
成德1
王亮1
1.江苏大学食品与生物工程学院,江苏镇江 2120002.济南亿民动物药业有限公司,山东济南 250000
摘要：该研究将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因片段与抗菌肽牛乳铁蛋白肽(LfcinB-His)基因片段的N末端连接,构建以EGFP为报告基因的胞内表达载体,融合表达重组蛋白EGFP-LfcinB-His,并对其进行活性检测.将重组表达质粒电转入毕赤酵母GS115中,筛选阳性转化子,甲醇诱导其发酵表达,488 nm的激发光下检测到较强的荧光.当酵母细胞培养达到最高密度后,收集菌体细胞,破壁,用酵母细胞蛋白裂解液进行裂解.裂解液经过超滤浓缩、Ni-NTA亲和层析、甲酸裂解等纯化步骤后,Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量为4.1 ku的目标蛋白(LfcinB-His)条带.通过液质联用测定与分析,最终获得了纯度为90.32％的LfcinB-His超滤浓缩液,对测试的6株致病菌均有不同程度的抑制作用,抑菌浓度范围在16～64 μg/mL.综上,该研究为毕赤酵母表达小分子多肽提供了较好的方法学参考,也为进一步研究LfcinB的生物活性及高密度发酵奠定了基础.
关键词：牛乳铁蛋白肽绿色荧光蛋白毕赤酵母融合表达蛋白纯化
资助基金：四川省科技计划项目(2022JDZH0036)四川省科研院所科技成果转化基金项目(22YSZH0016)江苏大学高水平大学-师资建设-科研启动基金(4111360007)江苏大学高级专业人才科研启动基金项目(12JDG069)
论文发表日期：2024-12-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 67-74 )
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