毕赤酵母中Tet-on诱导系统的开发与优化
邹弘毅
梁书利
华南理工大学生物科学与工程学院,广东 广州 511400
摘要：基因表达精准调控对于高效能细胞工厂构建至关重要,基于非营养源的小分子诱导系统在基因表达调控具有广泛的应用潜力.该研究在巴斯德毕赤酵母中开发了基于强力霉素响应的Tet-on诱导系统,并进一步对该系统的各个元件进行优化.通过筛选合适的核心启动子序列、优化控制rtTA表达的启动子、转录激活结构域优化以及构建rtTA突变体,最终得到一系列的可响应强力霉素的诱导型启动子.其中基于rtTA-V10的Tet-on诱导系统拥有较低的本底水平泄露(荧光值为野生型菌株的1.05倍),而在添加强力霉素后,荧光强度的动态范围达到了 52.76倍.而基于rtTA-VPR的Tet-on诱导系统在各种碳源条件下都表现出良好的表达强度,甲醇条件下达到了 PAOX1的111.16％,在甘油、乙醇、葡萄糖条件下达到了 PGCW14的110.65％、106.05％、112.24％.通过添加不同浓度的诱导剂即可以实现基因的精细化调控,这为毕赤酵母代谢工程和合成生物学领域中基因表达精准调控提供有力的遗传操作工具.
关键词：Tet-on系统毕赤酵母启动子
资助基金：国家自然科学基金(32272276)
论文发表日期：2025-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 163-171 )
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