华山松ISSR反应体系的优化
李翠新
何德
1.西南林业大学 生命科学学院,昆明,6502242.西南林业大学 生命科学学院,昆明,650224
摘要：为获得条带清晰、稳定和多态性高的华山松ISSR扩增结果,对引物、Mg2+浓度和退火温度等因素进行了优化.确定了ISSR分析的最佳PCR条件:15 μL反应体系中,10×PCR buffer反应缓冲液1.5 μL,模板DNA 22.5 ng,Mg2+2.2 mmol/L,dNTPs 0.23 mmol/L,引物0.93 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.027 U/μL.PCR反应程序为:经94℃预变性4 min后,经过94℃变性30 s,Tm-4.8℃退火30 s,72℃延伸108 s共33个循环;循环结束后72℃延伸10 min.从44条ISSR引物中筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.对华山松ISSR实验优化体系的建立,为今后利用IS-SR分子标记技术开展华山松种间遗传变异分析和构建遗传图谱等研究奠定了基础.
关键词：华山松ISSR优化PCR
分类号：S722.5(造林学、林木育种及造林技术)
资助基金：云南省应用基础研究计划(2008ZC092M)云南省教育厅科研项目(2014J093)云南省优势特色重点学科生物学一级学科建设项目(50097505)
论文发表日期：2018-04-02
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 121-124,155 )
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