腐食酪螨双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用
李辉平1
孙佳琪2
牛梦娜1
袁连焰1
徐平1
林金盛1
侯立娟1
蒋宁1
马林1
曲绍轩2
1.江苏省农业科学院 蔬菜研究所,南京 2100142.江苏省农业科学院 蔬菜研究所,南京 210014;江苏大学 生命科学学院,江苏 镇江 212013
摘要：为开发腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测技术,以螨虫总蛋白免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体;同时以螨虫变应原Tyr p10 蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了单克隆抗体.以多抗为包被抗体,单抗为酶标抗体,建立双抗体夹心法ELISA检测技术,并对其在糙皮侧耳培养料及菌丝中的检测灵敏度和可靠性进行了验证.结果显示,兔源螨虫多抗纯度达到 85%以上,质量浓度为 1.70 mg/mL,效价在870.4×103 倍左右;从 38 株杂交瘤细胞株筛选到 1 株细胞株(AntiTput-10),抗体纯化达到 90%以上,质量浓度为3.1mg/mL,亲和常数为2.71×1010.经棋盘滴定法确定包被抗体质量浓度为100μg/mL、酶标抗体稀释度为1∶2000.所建立的ELISA检测方法可从食用菌培养料中检测出腐食酪螨4 头/g,具有较高的灵敏度.该方法能应用于不同场景的螨虫检测.
关键词：腐食酪螨ELISA多克隆抗体单克隆抗体Tyr p10蛋白
分类号：S646.1(园艺)
资助基金：国家自然科学基金(32573111)现代农业产业技术体系(CARS-20)
论文发表日期：2025-12-30
在线出版日期：2025-12-10（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 470-475,503 )
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