重叠延伸PCR方法的建立与应用
曹阳
李冬田
尹冰楠
佟惠春
1.300070,天津市,天津医科大学微生物教研室2.300070,天津市,天津医科大学微生物教研室3.300070,天津市,天津医科大学微生物教研室4.300070,天津市,天津医科大学微生物教研室
摘要：目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internal ribosome entry site)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备.方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3'端与IRES基因5'端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段.结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段.结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值.
关键词：重叠延伸聚合酶链式反应腺病毒载体
分类号：R4(临床医学)
资助基金：Tianjin Natural Sci. Found(013615811)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：2( 803-804 )
英文信息