KLF4基因沉默对大鼠肝星状细胞 HSC-T6胶原代谢的影响及机制研究
李涛1
牛丽娟2
刘文宣1
杨磊1
李曼1
曹丹丹1
彭乱顺3
1.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室, 石家庄市,0500172.河北省石家庄市第三医院肿瘤科3.河北省石家庄市第三医院老年病科
摘要：目的：探讨大鼠KLF4基因沉默，对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及其机制。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒（pGPU6-1，pGPU6-2，pGPU6-3）以及阴性对照。采用实时荧光定量RT-PCR（ Real-time RT-PCR ）和western blot的方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况，筛选出沉默最好的干扰质粒，将筛选出来的干扰质粒pGPU6-3，转染大鼠HSC-T6细胞。转染24 h和48 h后分别采用Real-time RT-PCR法和western blot的方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）mRNA和蛋白的表达。 Real-time RT-PCR法以GAPDH为内参照，用2－ΔΔCt法进行分析计算。 western blot的方法以β-actin蛋白为内参照，进行分析。结果 Real-time RT-PCR结果显示， pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1相对于对照组的mRNA表达分别下降为0敂．358±0．038，0．298±0．041和0．478±0．048；而MMP-13 mRNA的表达则上升为1．712±0．034。 Western Blot检测中，pG-PU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后，以β-actin为内参照，Ⅰ型胶原蛋白，Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1蛋白的表达分别下降为0．326±0．051，0．283±0．074和0．331±0．039；而MMP-13蛋白的表达则上升为1．273±0．038。结论 KLF4基因沉默可以显著减少大鼠HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达，其机制与增加MMP-13表达，而抑制TIMP-1的表达有关。
关键词：人肝星状细胞KLF4Ⅰ型胶原Ⅲ型胶原MMP-13
分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)
资助基金：河北省医学科学研究重点课题(20150627)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3080-3083,3087 )
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