miR-17靶向调控Akt2在抑制宫颈癌细胞增殖中的作用及机制研究
陈丹
李媛媛
赵俊
1.442000 湖北省十堰市妇幼保健院2.442000 湖北省十堰市妇幼保健院3.442000 湖北省十堰市妇幼保健院
摘要：目的 探讨miR-17在宫颈癌组织以及细胞株中的表达情况,验证miR-17与Akt2之间是否存在靶向调控关系,探讨miR-17靶向调控Akt2在宫颈癌细胞增殖中的作用及机制研究.方法 采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测23例宫颈癌患者以及正常组织中miR-17的表达,同时检测2株宫颈癌细胞系(siHa、Hela)及1株正常宫颈上皮细胞H8中miR-17的表达.分别将miR-17抑制物、模拟物(mimics)和对照经脂质体转染Hela细胞48 h后,qRT-PCR检测转染效率,MTS法检测细胞增殖活力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,western-blot检测转染后下游Foxo1A以及Bcl-2蛋白的表达情况.TargetScan软件预测结果表明Akt2为miR-17的靶基因,构建含有野生型或突变型Akt2基因3'-UTR区域的双荧光素酶报告基因载体,分别检测野生型或突变型Akt2基因与miR-17 mimics、抑制物以及vector共转染后对荧光素酶的活性影响.结果 qRT-PCR结果显示miR-17在宫颈癌组织的表达显著高于癌旁正常组织,在宫颈癌细胞系中的表达水平亦显著高于正常宫颈上皮细胞.MTS以及平板克隆实验检测发现过表达miR-17后,Hela细胞的增殖以及克隆形成能力明显降低,细胞的凋亡率显著升高,western-blot实验检测发现Foxo1A以及Bcl-2蛋白的表达明显增加;抑制miR-17的表达后,细胞增殖以及克隆形成能力显著增强,细胞凋亡率明显降低,Foxo1A以及Bcl-2的表达降低.TargetScan软件预测结果表明Akt2为miR-17的直接靶基因,Akt2和miR-17 mimics共转染组较Akt2+miR-17抑制剂以及miR-17 vector共转染组的荧光素酶活性强度显著降低.结论 miR-17可通过靶向调控Akt2进而调控Foxo1A和Bcl-2,抑制宫颈癌细胞的增殖.
关键词：宫颈癌miR-17Akt2增殖靶向调控
分类号：R737.33(泌尿生殖器肿瘤)
论文发表日期：2020-07-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2089-2094 )
英文信息