血管紧张素Ⅱ通过Raf/MEK/ERK通路对PDGF诱导的气道上皮细胞转分化的影响
杨丹芬1
谢圆媛1
康睿2
1.716000 陕西省延安市,延安大学附属医院老年病科2.716000 陕西省延安市,延安大学附属医院呼吸内科
摘要：目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对加速纤维肉瘤蛋白(Raf)/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调控作用,及对血小板源生长因子(PDGF)诱导的气道上皮细胞转分化(EMT)的影响.方法 取人气道上皮细胞株16-HBE,分为对照组、PDGF不同浓度刺激组(5、25、50、100、200 ng/L),用免疫荧光法检测各组细胞EMT标志物波形蛋白(vimentin)阳性表达,选出合适的PDGF诱导浓度.将16-HBE细胞分为正常对照组、PDGF诱导组(100 ng/L)、AngⅡ不同浓度组(10-7、10-6、10-5 mol/L),用倒置显微镜检测细胞形态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞EMT相关蛋白E-粘钙素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、vimentin,气道纤维化相关蛋白-纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅳ(ColⅣ),Raf/MEK/ERK通路相关蛋白Raf、MEK及磷酸化水平(p-MEK)、ERK及磷酸化水平(p-ERK)、转化生长因子β1(TGF-β1)等蛋白相对表达水平.将16-HBE细胞分为正常对照组、PDGF诱导组、AngⅡ组(10-6 mol/L)、Raf/MEK/ERK通路抑制剂(sorafenib)组(10μmoL/L)、AngⅡ+sorafenib(10-6 mol/L+10μmol/L)组,检测细胞形态及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达.结果 PDGF不同浓度处理下,细胞vimentin阳性表达随浓度升高逐渐升高,并在100～200 ng/L时上升至稳定水平,选取100 ng/L为诱导浓度.AngⅡ不同浓度处理后,与正常对照组比较,PDGF诱导组细胞紧密连接减少,细胞呈长梭形等改变,E-cadherin表达降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、FN、ColⅣ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05);与PDGF诱导组比较,AngⅡ不同浓度处理组细胞长梭形改变进一步加重,E-cadherin表达进一步降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、FN、ColⅣ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达进一步升高(P<0.05),且AngⅡ浓度10-6 mol/L组及10-5 mol/L浓度组上述指标变化优于10-7 mol/L组,AngⅡ浓度10-6 mol/L组与10-5 mol/L浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05).AngⅡ与sorafenib联合应用后,与正常对照组比较,PDGF诱导组细胞紧密连接减少,长梭形改变较多,Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05).与PDGF诱导组相比,AngⅡ组细胞紧密连接减少,长梭形改变较多,Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达进一步升高(P<0.05),sorafenib组Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达降低(P<0.05).AngⅡ+sorafenib组上述指标变化与AngⅡ组相反,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 AngⅡ可通过激活Raf/MEK/ERK通路表达,促进PDGF诱导的气道上皮细胞EMT进程.
关键词：血管紧张素Ⅱ气道上皮细胞加速纤维肉瘤蛋白丝裂原活化的细胞外信号调节激酶细胞外信号调节激酶血小板源生长因子转分化
分类号：R562.25(呼吸系及胸部疾病)
论文发表日期：2022-04-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1141-1146 )
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