miR-124所修饰rDPSCs来源外泌体对巨噬细胞极化的影响研究
刘兰宁
唐焕珍
李晓媛
510315 广州市,南方医科大学中西医结合医院口腔科
摘要：目的 探讨miR-124修饰的大鼠牙髓干细胞(rDPSCs)来源外泌体对巨噬细胞极化的影响.方法 从SD大鼠牙髓中分离出rDPSCs,流式细胞术鉴定rDPSCs表面标志物CD14、CD34、CD45、CD90、CD105、CD146的阳性比率;油红O染色、茜素红S染色观察rDPSCs成脂成骨能力.利用细胞转染技术将miR-124模拟物(miR-124 mimics)及其阴性对照(miR-NC)转染于rDPSCs,分组为空白组、miR-NC组、miR-124组,并提取转染后rDPSCs的外泌体,分别命名为Exosome组(Exo组)、Exo/miR-NC组、Exo/miR-124组,透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63和CD81表达水平;qRT-PCR检测rDPSCs及rDPSCs外泌体中miR-124表达水平.将25只大鼠随机分为sham组、model组、rDPSCs Exo组、rDPSCs Exo/miR-NC组和rDPSCs Exo/miR-124组,每组5只,构建皮肤缺损模型,分别于皮肤缺损相应区域注射30μl对应的外泌体进行干预,qRT-PCR检测大鼠创伤组织中miR-124表达水平;ELISA法检测大鼠血清中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、甘露糖受体(CD206)含量;Western blot检测大鼠创伤组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-1β、白细胞介素(IL)-6、IL-4、IL-10、IL-13蛋白表达.结果 rDPSCs表面标志物CD14、CD34、CD45的阳性比率均低于CD90、CD105、CD146;rDPSCs具有成骨成脂能力;透射电镜可观察到外泌体为大小均一,直径50～100 nm,呈圆形或椭圆形的囊泡结构;CD63和CD81蛋白在rDPSCs外泌体中高表达;与空白组和miR-NC组比较,miR-124组rDPSCs中miR-124表达水平显著升高,且Exo/miR-124组rDPSCs外泌体中miR-124表达水平显著高于Exo组和Exo/miR-NC组(P<0.05);与sham组比较,model组大鼠血清中iNOS含量、创伤组织中TNF-α、TNF-1β、IL-6蛋白表达显著升高,CD206含量、IL-4、IL-10、IL-13蛋白表达显著降低(P<0.05);与rDPSCs Exo组和rDPSCs Exo/miR-NC组比较,rDPSCs Exo/miR-124组中iNOS含量、TNF-α、TNF-1β、IL-6蛋白表达显著降低,CD206含量、IL-4、IL-10、IL-13蛋白表达显著升高(P<0.05).结论 miR-124过表达修饰的rDPSCs外泌体可通过抑制M1型巨噬细胞极化、促进M2型巨噬细胞极化来调控炎性反应.
关键词：牙髓干细胞外泌体miR-124巨噬细胞
分类号：R78(口腔科学)
论文发表日期：2022-06-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1769-1774 )
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