LncRNA CBR3-AS1调节miR-409-3p/hnRNPA2B1轴对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响
陈仕
黎慧娟
许若思
张彩英
陈露
410007 长沙市,湖南省第二人民医院消化内科
摘要：目的 探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1 和miR-409-3p表达水平.双荧光素酶检测 LncRNA CBR3-AS1 和 miR-409-3p及 hnRNPA2B1 和miR-409-3p的靶向关系.将Hep G2 细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1 组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组.平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9 蛋白的表达变化.小鼠移植瘤实验检测LncRNA CBR3-AS1对肝癌肿瘤生长及miR-409-3p/hnRNPA2B1 的影响.结果 与癌旁组织比较,癌组织中LncRNA CBR3-AS1 表达显著升高,miR-409-3p表达显著降低(P<0.05).StarBase预测显示LncRNA CBR3-AS1 与miR-409-3p有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与LncRNA CBR3-AS1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组LncRNA CBR3-AS1 表达明显下降,miR-409-3p表达明显上升(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组miR-409-3p表达明显下降(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).生物信息学分析显示miR-409-3p与hnRNPA2B1 有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与hnRNPA2B1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组miR-409-3p表达明显上升,hnRNPA2B1 表达明显下降(P<0.05);与 miR-409-3p mimics+pcDNA 组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组 hnRNPA2B1 表达明显上升(P<0.05),与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,小鼠注射转染si-CBR3-AS1 的细胞后,移植瘤体积生长缓慢.与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组移植瘤中LncRNA CBR3-AS1 表达水平下降,miR-409-3p表达水平升高(P<0.005).免疫组化检测结果显示,si-CBR3-AS1 组移植瘤中,hnRNPA2B1 蛋白表达水平显著降低(P<0.005).结论 LncRNA CBR3-AS1 在肝癌中表达升高,下调LncRNA CBR3-AS1 的表达,可上调miR-409-3p表达,从而下调hnRNPA2B1 表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡.
关键词：长链RNA CBR3-AS1微小RNA-409-3p核不均一核糖核蛋白A2B1肝癌增殖凋亡迁移侵袭
分类号：R735.7(消化系肿瘤)
资助基金：湖南省卫生健康委员会资助项目(D202303107884)
论文发表日期：2023-12-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 3685-3690 )
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