USTB-05-B基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究
张旭东1
王华生2
刘祖文1
闫海3
1.江西理工大学建筑与测绘工程学院,江西 赣州,3410002.江西理工大学建筑与测绘工程学院,江西 赣州 341000;江西省环境岩土与工程灾害控制重点试验室,江西 赣州 3410003.北京科技大学化学与生物工程学院,北京,100086
摘要：采用生物学技术对高效降解线性微囊藻毒素-LR (microcystin-LR,MC-LR)的USTB-05-B酶进行克隆表达及纯化研究.首先利用分子克隆技术得到重组菌pET30a(+)/USTB-05-B/BL21 (DE3).在诱导剂IPTG浓度为0.25 mmol/L、温度30℃和诱导时间4h条件下,重组菌能大量表达目的蛋白.然后利用亲和层析柱对重组菌破碎后的无细胞提取液(cell free extracts,CE)进行纯化,当咪唑浓度为100 mmol/L时,洗脱下来的蛋白纯度高.最终得到USTB-05-B蛋白纯度为91.1‰,浓度为0.205 mg/mL.纯化后的USTB-05-B酶具有较高的活性,能在1h内将10.8 mg/L的线性MC-LR降解完全.纯化后的目的蛋白为研究USTB-05降解MCs分子机理奠定基础,为有效提高降解MCs速率提供新材料.
关键词：微囊藻毒素分子克隆亲和层析纯化
分类号：X172(环境生物学)
资助基金：国家自然科学基金(21467009)国家自然科学基金(21677011)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
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