HPLC法测定CYP 3A4酶活性的研究
苏明威1
辛华雯2
李维亮2
熊磊2
余爱荣2
李罄2
王乃平3
1.广州军区武汉总医院临床药理科,武汉,430070;广西中医学院2.广州军区武汉总医院临床药理科,武汉,4300703.广西中医学院
摘要：目的 建立一种快速、准确的以咪达唑仑作为"探针药物"评价或测定细胞色素酶(CYP3A4)酶活性的高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)-紫外检测(UV detection,VWD)方法.方法 采用的色谱柱为依立特C18柱(4.6 mm×100 mm,5 μm),流速0.8 ml/min,紫外检测波长254 nm,柱温40 ℃.咪达唑仑(midazolam,MDZ)与大鼠肝微粒体温孵后,加入甲醇在低温下终止反应,再加入定量内标地西泮(diazepam,DZP),涡旋后高速离心,取上清液50 μl进样.结果 1′-羟基咪达唑仑(1-hydroxymidazolam,1′-OHMDZ)与内标DZP tR分别为7.02 min、10.51 min,峰形对称且分离充分(R>1.5),线性范围为15.6～780 ng·ml-1,最低定量限(lower limit of quantitation,LLOQ)为15.6 ng·ml-1,高中低浓度提取回收率为106.3%、102.5%和102.6%,待测物的日内、日间相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于10%.肝微粒体Km=15 μmol·L-1,Vmax=0.081 59 nM·min-1·mg-1.结论 温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定.该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外DZP及其代谢产物1′-羟基咪达唑仑的测定,可用于体外CYP 3A酶活性测定或酶动力学研究.
关键词：CYP 3A肝微粒体咪达唑仑1′-羟基咪达唑仑高效液相色谱
分类号：R446(诊断学)
资助基金：湖北省卫生厅科学研究项目(JX3B38)
论文发表日期：2009-09-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 53-56 )
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