簇分化抗原74基因转染对人脐静脉内皮细胞ECV304特性的影响

姜艳红

摘要：目的探讨簇分化抗原74(cluster of differentiation 74,CD74)基因在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的转染条件和CD74基因转染对细胞特性及功能的影响,为深入研究基于调节CD74表达的生物治疗打下基础.方法 ①将含有CD74 cDNA的pCMV-CD74增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒通过转化大肠杆菌进行扩增、质粒提取、并经酶切和测序进行鉴定；②将pCMV-CD74质粒转染脐静脉内皮细胞ECV304,通过EGFP荧光质粒对ECV304细胞进行转染率的检测；③采用免疫组化法和Western blot,检测转染前后ECV304细胞CD74分子的表达；采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测转染后CD74 mRNA水平的表达；④pCMV-CD74质粒转染前后ECV304细胞功能相关基因人类白细胞抗原-A(human leukocyte antigens A,HLA-A)、人类白细胞抗原-DR (human leukocyte antigens DR,HLA-DR)、γ-干扰素受体(interferon-γ receptor,IFNGR)表达的检测:采用RT-PCR比较转染前后脐静脉内皮细胞各功能相关基因的表达；⑤应用RT-PCR分析软件分析实验数据.结果转染前后ECV304细胞HLA-A△Ct值分别为9.4881和12.1097,2 -△△Ct为6.1543大于2,说明转染前后HLA-A表达有统计学差异；IFNGR △Ct值分别为4.9828和5.5228,2-ΔΔCt为1.4539小于2,转染前后无统计学差异；HLA-DR△Ct值分别为14.1098和14.7924,2 - ΔΔCt为1.3036小于2,转染前后无统计学差异.结论人脐静脉内皮细胞ECV304表达HLA-A、HLA-DR、IFNGR和CD74mRNA; pCMV-CD74转染可增加ECV304细胞CD74基因和膜分子的表达,增加HLA-A基因的表达,但不增加HLADR和IFNGR的表达.