大鼠骨内膜骨髓细胞增殖和成软骨分化能力的体外研究
曾文波1
兰生辉2
陈美玲3
袁功武1
孙再杰4
聂宇5
刘曦明2
1.南方医科大学研究生院, 广东广州,5105152.解放军武汉总医院骨科湖北省骨创伤救治临床医学研究中心3.南方医科大学生物医学工程学院, 广东广州,5105154.510515 广东广州,南方医科大学研究生院;解放军武汉总医院骨科5.陆军工程大学军械士官学校门诊部
摘要：目的 对比骨内膜骨髓细胞(endosteal bone marrow cells,EBMCs)与中央骨髓细胞(center bone marrow cells,CBMCs)增殖及成软骨分化,为组织工程技术寻找较CBMCs更优良的种子细胞.方法 取健康雄性SD大鼠的双侧股骨及胫骨,采用酶消化法分离EBMCs,采取密度梯度离心法分离CBMCs予体外增殖克隆,通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞表面分子CD29、CD34、CD44、CD45的表达.集落形成单位(colony forming unit,CFU)检测细胞克隆形成,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,Brd U)检测细胞增殖能力,定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞周期抑制因子相关基因p15、p16、p21、p27的表达.成软骨诱导培养21d后行阿尔新蓝染色并提取mRNA行qRT-PCR检测对比成软骨分化相关基因SOX9、aggrecan、Co12α1的表达.结果 EBMCs与CBMCs表面分子CD29、CD44均呈阳性表达,CD34、CD45均呈阴性表达,但EBMCs表达较CBMCs表达低,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).CFU检测中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及结晶紫染色可见EBMCs比CBMCs颗粒沉淀数量更多,颗粒直径更大.Brd U检测细胞增殖能力,可见CBMCs的荧光信号倍增量(1.47±0.16),明显低于EBMCs的荧光信号倍增量(2.56±0.36),二者比较差异具有统计学意义(P＜0.001).细胞周期抑制因子p15、p16、p21、p27的表达,EBMCs中分别为0.315±0.052、0.158±0.023、0.416±0.051、0.100±0.022,明显低于CBMCs的1.000±0.000、0.481±0.064、1.342±0.135、0.461±0.156,二者比较差异有统计学意义(P＜0.001).阿尔新蓝染色可见EBMCs成软骨分化后染色蓝染较CBMCs更明显;EBMCs中成软骨骨分化相关基因SOX9,aggrecan,Col2α1的表达分别为1.783±0.305、0.918±0.201、0.384±0.108明显高于CBMCs的1.000±0.000、0.297±0.082、0.124±0.007,二者比较差异均具有统计学意义(P＜0.001).结论 EBMCs较CBMCs有更强的增殖分化能力,更适合做软骨组织工程的种子细胞.
关键词：表皮生长因子受体骨内膜骨髓细胞中央骨髓细胞成软骨分化
分类号：Q332(遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(81601902)湖北省自然科学基金(2015CFB240)湖北省自然科学基金(2014CFC1052)湖北省卫生和计划生育委员会联合基金项目(WJ2018H0064)湖北省卫生计生西医类一般项目(WJ2015MB119)中国博士后科学基金(2015M572817)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 215-220 )
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