人miR-331-3p慢病毒表达载体的构建及其在HER-2阳性乳腺癌细胞中的表达
黄前川
艾翠方
丁进亚
1.430070湖北武汉,中部战区总医院检验科2.430070湖北武汉,中部战区总医院检验科3.430070湖北武汉,中部战区总医院检验科
摘要：目的 构建miR-331-3p慢病毒表达载体,并检测其在人表皮生长因子2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)高表达乳腺癌细胞系SKBR3中的表达情况.方法 根据miR-331-3p基因序列设计并合成1对miR-331-3p的oligo DNA,退火形成双链与pcDNA6.2-GW/EmGFP-rniR载体相连后扩增,将扩增产物GFP-miR-331-3p与pLenti6.3-MCS/V5 DEST连接构建慢病毒表达载体pLenti6.3-miR-331-3p;用脂质体将pLenti6.3-miR-331-3p及包装质粒共转染293T细胞形成Lenti-miR-331-3p,收集上清Lenti-miR-331-3p后感染293T细胞株进行滴度鉴定;将Lenti-miR-331-3p转染HER-2高表达乳腺癌细胞SKBR3,荧光显微镜观察荧光阳性细胞百分率,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测miR-331-3p表达水平.结果 经PCR扩增测序证实,成功构建携带人miR-331-3p 慢病毒表达载体Lenti-miR-331-3p,并测得滴度＞109 TU/ml;荧光显微镜下SKBR3的荧光阳性率＞90％,qPCR检测证实miR-331-3p转染SKBR3后获得了高表达.结论 成功构建人miR-331-3p慢病毒表达载体,并可在乳腺癌细胞SKBR3高效表达,为后续验证miR-331-3p靶向调控癌基因HER-2的表达和功能奠定了实验基础.
关键词：乳腺癌微小RNA人表皮生长因子2慢病毒
分类号：R737.9(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：湖北省卫生健康委科研联合项目(WJ2018H0075)
论文发表日期：2019-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 803-806 )
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