miR-199a-5p靶向MagT1在慢性HBV感染中引起T细胞功能耗竭的作用机制
莫琼1
袁紫林2
刁波2
罗绮莉2
1.430065湖北武汉,武汉科技大学医学院2.中部战区总医院医学实验科
摘要：目的 研究miR-199a-5p靶向镁离子转运蛋白1(Magnesium transporter 1,MagT1)在慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染中引起T细胞功能耗竭的分子作用机制.方法 ①选取经临床确诊的慢性乙型肝炎患者10例,经检测其HBV-DNA检测值持续6月达1.0×105 IU/ml,且排除其它类型的病毒感染、肝硬化、肝癌等,并选取体检者10例作为正常对照组.②采集患者外周血,分离单个核细胞,用γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)、白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、CD3抗体、白细胞介素1α(interleukin 1 αlpha,IL-1α)活化T细胞;流式细胞仪进行T细胞亚群分析.③荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测慢性HBV感染组与正常对照组T细胞中miR-199a-5p、程序性细胞死亡因子1(programmed cell death 1,PD-1)和MagT1基因表达情况.④双荧光素酶报告基因系统鉴定miR-199a-5p与MagT1的靶向关系.⑤构建包装miR-199a-5p/miR-199a-5p sponge慢病毒载体,感染T细胞后RT-qPCR分别检测慢病毒感染后T细胞miR-199a-5p、PD-1和MagT1基因表达;⑥Western blot检测慢病毒感染T细胞前后MagT1、PD-1蛋白表达水平.结果 流式细胞仪检测表明慢性HBV感染组及正常对照组T细胞均活化成功.RT-qPCR检测表明慢性HBV感染组miR-199a-5p表达显著高于正常对照组(P＜0.01),PD-1表达也显著高于正常对照组(P＜0.01),但MagT1表达显著低于正常对照组(P＜0.01).双荧光素酶报告基因系统证实miR-199a-5p靶向MagT1 3'UTR并抑制其表达(P＜0.05).RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-199a-5p/miR-199a-5p sponge分别显著上调或下调miR-199a-5p表达(P＜0.01).上调miR-199a-5p表达后,RT-qPCR表明MagT1基因表达显著低于对照组(P＜0.01),PD-1基因表达显著高于对照组(P＜0.01),且正常对照组均高于HBV感染组(P＜0.01);Western blot表明MagT1蛋白表达水平显著下降(P＜0.01),PD-1蛋白水平显著升高(P＜0.01),且正常对照组高于HBV感染组(P＜0.01).下调miR-199a-5p表达后,MagT1表达量显著高于对照组(P＜0.05),PD-1表达量显著低于对照组(P＜0.01),且HBV感染组低于正常对照组(P＜0.01);Western blot表明MagT1蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),PD-1蛋白水平显著降低(P＜0.01),且HBV感染组低于正常对照组(P＜0.01).结论 在慢性HBV感染中,miR-199a-5p可以负向调节靶基因MagT1的表达,并对活化后T细胞功能耗竭具有重要的调节作用.
关键词：miR-199a-5p镁转运蛋白1T细胞耗竭慢性乙型肝炎病毒
分类号：R512.6+2(传染病)
资助基金：湖北省自然科学基金面上项目(2016CFC747)
论文发表日期：2020-02-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 73-77 )
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