糜烂性毒剂氮芥染毒诱导急性肝损伤中自噬的变化及作用
李佳威1
刘梦慧2
刘思佳1
刘建豪1
马丞飞1
赵昱舜1
徐安琦1
艾多1
孔德钦1
李文丽1
刘江正1
1.710032 陕西西安,空军军医大学军事预防医学系军事毒理学与防化医学教研室2.西安交通大学第二附属医院神经外科
摘要：目的 建立糜烂性毒剂氮芥(nitrogen mustard,HN2)诱导小鼠急性肝损伤模型和HN2染毒HepG2细胞(人源性肝癌细胞系)损伤模型,探讨自噬在糜烂性毒剂致急性肝损伤中的作用及机制.方法 体内模型中,将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组和HN2染毒组;HN2染毒组小鼠给予腹腔注射盐酸氮芥(2 mg/kg),正常对照组小鼠给予腹腔注射等体积的生理盐水.染毒3天后收集血清和肝组织,测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,进行肝组织苏木精-伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色病理检测,电镜观察线粒体等细胞器形态,Western blot检测肝组织自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和p62的蛋白表达.体外模型中,HepG2细胞分为正常对照组和HN2染毒组;正常对照组细胞给予含二甲基亚砜(dime-thyl sulfoxide,DMSO)(0.1％)的无血清培养基处理36 h.HN2染毒组细胞给予盐酸氮芥(8μmol/L)处理36h.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞活性,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)探针法检测线粒体自噬改变,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)检测肝细胞自噬流的改变;在细胞模型中,给予自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)预处理干预,检测细胞活力水平.结果 在体内模型中,与正常对照组比较,HN2染毒组小鼠血清ALT和AST活性显著升高(P均＜0.05),同时肝组织存在大量炎细胞浸润并伴有肝实质细胞损伤;肝实质细胞内出现大量自噬体,肝组织LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05),同时p62的蛋白表达显著下调(P＜0.05).在体外模型中,与正常对照组相比,HN2染毒组细胞活性显著降低(P＜0.05),MDC荧光强度显著升高,自噬体数量增加(P均＜0.05).在HN2染毒细胞模型中,给予自噬激动剂RAPA预处理后细胞活力显著升高(P＜0.05),而给予自噬抑制剂3-MA预处理后细胞活力显著降低(P＜0.05).结论 HN2染毒能够诱导肝细胞发生自噬,细胞自噬可能是糜烂性中毒的关键性保护性反应,本研究为糜烂性毒剂诱导急性肝损伤的有效防治提供了新方向.
关键词：氮芥糜烂性毒剂自噬急性肝损伤中毒
分类号：R827(军事医学)
资助基金：国家自然科学基金(31900892)陕西省重点研发计划一般项目(2023-YBSF-297)国家重点实验室开放基金(2021KB04)空军军医大学军事医学与航空医学重大问题科技攻关课题(2022ZZXM042)
论文发表日期：2023-11-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 903-910 )
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