miR-149-3p靶向调节Akt1介导牙周膜干细胞成骨分化的作用机制研究
袁琴
张玲玲
戴丽
章茜
卫峥
210000 江苏南京,南京大学医学院附属口腔医院口腔科
摘要：目的 探讨miR-149-3p靶向调节蛋白激酶B(protein kinase B,Akt1)介导牙周膜干细胞(periodontal liga-ment stem cells,PDLSCs)成骨分化的作用及机制.方法 选取2022-01月在作者医院口腔科就诊的18～25岁患者因正畸而拔除的前磨牙或第三磨牙,分离牙周膜组织,提取人PDLSCs.免疫组织化学染色法检测角蛋白(pan-cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)鉴定人PDLSCs.将人PDLSCs分为对照组、空载组、miR-149-3p inhibitor组和miR-149-3p mimic组.对照组人 PDLSCs 不进行处理,空载组、miR-149-3p inhibitor 组和 miR-149-3p mimic 组按 Lipofectamine 3000 说明书方法分别将空载质粒和miR-149-3p inhibitor、miR-149-3p mimic转染到人PDLSCs.实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内 miR-149-3p、碱性磷酸酶(alkaline phos-phatase,ALP)、Runt 相关转录因子 2(runt-related transcription factor 2,Runx2)Akt1 mRNA 表达;Western blot 检测细胞内ALP、Runx2、Akt1蛋白表达.采用Fluo-3 AM探针检测细胞内钙离子.结果 免疫组织化学结果显示,人PDLSCs 二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)染色 vimentin 呈阳性,pan-cytokeratin 呈阴性,提示 PDLSCs 提取成功.与对照组和空载组相比,miR-149-3p inhibitor组miR-149-3p表达显著降低,ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著升高(P均＜0.05);miR-149-3p mimic组miR-149-3p表达显著升高,ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著降低(P均＜0.05).与miR-149-3p inhibitor组相比,miR-149-3p mimic组miR-149-3p表达显著升高,ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著降低(P均＜0.05).对照组与空载组各指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 过表达miR-149-3p可靶向抑制Akt1蛋白的表达,从而抑制成骨标志物ALP和Runx2表达,降低人PDLSCs内钙离子浓度,不利于人PDLSCs成骨分化.
关键词：miR-149-3p蛋白激酶B牙周膜干细胞成骨分化
分类号：R781.4(口腔内科学)
资助基金：国家自然科学基金(82103516)
论文发表日期：2024-01-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
英文信息