活细胞成像观察肿瘤坏死因子α诱导的人支气管上皮细胞谷胱甘肽S-转移酶MU 5核转位情况
曾燕婷1
张佳坷1
袁伟锋2
何文源3
徐虹4
李理1
1.510000 广东广州,南部战区总医院感染科2.广东药科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科3.510000 广东广州,南部战区总医院病理科4.510000 广东广州,南部战区总医院呼吸与危重症医学科
摘要：目的 建立肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)诱导的人支气管上皮细胞(human bron-chus epithelial,16HBE)炎症模型,观察谷胱甘肽 S-转移酶 MU 5(glutathione S-transferase MU 5,GSTM5)核转位动态过程,探讨GSTM5对炎症和氧化应激的影响.方法 GSTM5真核表达载体和小干扰核糖核酸(small interfering RNA,siRNA)转染16HBE细胞后,以TNF-α处理.将实验分为7个组:16HBE组、16HBE+TNF-α组(TNF-α刺激)16HBE+con083+TNF-α 组(转染 con083-GFP 重组质粒,TNF-α 刺激)、16HBE+GSTM5 组(转染 GV230-GSTM5-GFP)、16HBE+GSTM5+TNF-α 组(转染 GV230-GSTM5-GFP,TNF-α 刺激)、16HBE+siGSTM5+TNF-α 组(加入沉默GSTM5的siRNA,TNF-α刺激)、16HBE+NCsiRNA+TNF-α组(加入阴性对照siRNA,TNF-α刺激).通过蛋白免疫印迹分析、活细胞成像和共聚焦显微镜观察GSTM5核转位的动态过程.四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)评估 16HBE 的细胞存活率,丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxi-dative capacity,T-AOC)评估炎症氧化应激水平.酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞上清液中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的浓度.结果 16HBE细胞经TNF-α处理0.5 h后,细胞核内绿色荧光增强,提示GSTM5转移到16HBE细胞核内.TNF-α能显著降低16HBE细胞存活率和T-AOC,GSTM5能降低IL-6、IL-10和MDA水平.16HBE+TNF-α组IL-6、IL-10显著高于16HBE+GSTM5+TNF-α 组(P＜0.001).结论 TNF-α刺激致炎症氧化失衡可诱导16HBE株中GSTM5发生核转位,活细胞成像记录了其动态变化过程.
关键词：谷胱甘肽S-转移酶MU5人支气管上皮细胞核转位肿瘤坏死因子α活细胞成像
分类号：R363(病理学)
资助基金：国家自然科学基金(81070003)
论文发表日期：2025-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 371-377 )
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