AIM2过表达和敲降慢病毒载体的构建及其效果验证
王钰1
刘莹2
刘华荆2
任菲菲3
王越3
刁波2
1.442000 湖北武汉,武汉科技大学医学院2.中枢神经系统肿瘤发生与干预湖北省重点实验室3.中部战区总医院检验科
摘要：目的 构建黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2,AIM2)基因过表达和敲降慢病毒载体,利用人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系RPMI8226验证上述慢病毒过表达及敲降AIM2基因的效果.方法 利用基因重组技术合成含AIM2全基因片段的重组质粒和AIM2目标靶向短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)基因片段的重组质粒.经菌落聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序验证后进行慢病毒包装及滴度测定,适宜条件下感染RPMI8226细胞.AIM2过表达实验分组:WT组(未添加慢病毒,空白对照)、OE-NC组(添加50μlOE-NC慢病毒,阴性对照)、OE-AIM2组(AIM2过表达,加入66.67 μl OE-AIM2慢病毒).AIM2敲降实验分组:WT组(未添加慢病毒,空白对照)、NC组(添加32.26 μl NC慢病毒,阴性对照)、shRNA1组(添加33.33 μl shRNA1慢病毒,AIM2敲降靶点1)、shRNA2组(添加33.33 μl shRNA2慢病毒,AIM2敲降靶点2)、shRNA3组(添加33.33 μl shRNA3慢病毒,AIM2敲降靶点3).使用荧光显微镜检测荧光、实时荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及Western blot等方法检测慢病毒对细胞AIM2基因的过表达和沉默效果.结果 测序结果显示,AIM2过表达重组质粒含有目的序列,AIM2敲降重组质粒分别含有3条靶序列.qPCR及Western blot检测结果表明,OE-AIM2组较OE-NC组的AIM2 mRNA和蛋白表达水平明显上调(P均＜0.05);shRNA1组、shRNA2组及shRNA3组的AIM2 mRNA及蛋白表达水平较NC组均下调(P均＜0.05).结论 本研究成功构建了 AIM2基因过表达及敲降慢病毒载体,并验证了其过表达和敲降AIM2基因的有效性,获得了稳定过表达AIM2和稳定敲降AIM2的RPMI826细胞.
关键词：多发性骨髓瘤黑色素瘤缺乏因子2重组质粒慢病毒载体效果验证
分类号：R456(治疗学)
资助基金：湖北省重点实验室开放基金(ZZYKF202210)
论文发表日期：2025-07-28
在线出版日期：2025-08-27（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 565-572 )
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