消黄去疸汤通过调节细胞自噬对肝纤维化的保护作用机制研究
陈利锋1
张玉杰2
夏浩2
王档2
1.430070 湖北武汉,中部战区总医院研究生培养基地2.武汉科技大学医学部医学院
摘要：目的 探讨消黄去疸汤对肝纤维化的保护效果及其作用机制.方法 将18只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级小鼠随机分为对照组、模型组、中药高剂量、中药中剂量组、中药低剂量组和秋水仙碱组(阳性对照),每组3只.除对照组外,其余各组均以10％的CCl4橄榄油溶液腹腔注射,建立小鼠肝纤维化模型.测定各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、羟脯胺酸(hydroxyproline,HYP)的含量;采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和Masson染色观察肝组织病理形态学变化和胶原沉积情况,采用油红O染色观察肝组织脂质沉积情况;酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosor-bent assay,ELISA)检测透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ 型前胶原肽(type Ⅲ procollagen,PC Ⅲ)、Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen,Col Ⅳ)水平;免疫组织化学法观察肝组织平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin al-pha,α-SMA)、Ⅰ 型胶原(type Ⅰ collagen,Col Ⅰ)、转化生长因子 β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测肝组织蛋白P62、自噬相关基因Beclin1、微管相关蛋白轻链 3 Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3 Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)、单磷腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、自噬激活激酶1(Unc-51 like autophagy activating kinase 1,ULK1)基因表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中P62、Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、ULK1蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组,中药低、中、高剂量组和秋水仙碱组AST、ALT、HYP、LN、HA、PC Ⅲ、Col Ⅳ含量均显著升高(P＜0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达均升高(P＜0.05),Beclin-1、LC3基因表达水平升高(P＜0.01),P62蛋白和基因的表达水平均降低(P＜0.01),p-AMPK/AMPK、ULK1 蛋白和 AMPK、ULK1 基因表达明显升高(P＜0.05),p-mTOR/mTOR 蛋白及mTOR基因表达明显下降(P＜0.05).与模型组比较,中药中、高剂量组和秋水仙碱组AST、ALT、HYP、LN、HA、PCⅢ、Col Ⅳ含量下降(P＜0.05),肝脏炎性浸润和胶原沉积明显改善,肝脏脂肪沉积情况有所好转;Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低(P＜0.05),Beclin-1、LC3基因表达降低(P＜0.05),P62蛋白和基因表达上升(P＜0.05);α-SMA、Col Ⅰ、TGF-β1蛋白表达明显减少;通路相关指标:p-AMPK/AMPK、UKL1蛋白和AMPK基因表达下降(P＜0.05),p-mTOR/mTOR蛋白及mTOR基因表达明显升高(P＜0.05).结论 消黄去疸汤可一定程度上减轻肝纤维化,其机制可能是通过调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路,减轻肝细胞自噬,进而延缓肝纤维化进程.
关键词：消黄去疸汤肝纤维化自噬肝星状细胞单磷腺苷酸激活蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白/自噬激活激酶1信号通路
分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)
资助基金：湖北省自然科学联合基金重点项目(2022CFD020)中部战区总医院三英一队人才工程(第一批)(1683)(1683)
论文发表日期：2025-10-28
在线出版日期：2025-12-05（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 845-852 )
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