hClock-(35-47)的表达、纯化及其功能的检验
高梅
赵京卉
冀治鸿
刘延友
肖静
汪宇辉
王正荣
1.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,6100412.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,6100413.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,6100414.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,6100415.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,6100416.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,6100417.四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室,四川成都,610041
摘要：目的 构建hClock-(35-47)的表达质粒,进行诱导表达,纯化,在体外初步鉴定其跨膜功能.方法 合成hClock-(35-47)全长DNA序列,重组入pET-32a表达载体中,测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,构建好重组体的表达菌株.IPTG诱导并优化表达后,以NTA-Ni亲合层析进行分离纯化,及SDS-PAGE和Western bloting鉴定.纯化鉴定后的hClock-(35-47)用FITC标记,以一定的浓度孵育体外培养的血管内皮细胞(ECV-304),荧光显微镜下观察其穿膜活性.结果 成功构建了hClock-(35-47)的表达载体,插入片断为51 bp,表达产物相对分子质量约为21 kD,经Western bloting 鉴定,与抗His-Tag抗体有特异性反应, 与培养的ECV-304孵化,显示具有穿膜功能.结论 原核表达的hClock-(35-47)仍然保留其穿膜功能,为进一步研究提供基础.
关键词：hClock-(35-47)纯化内皮细胞穿膜功能
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30070278)国家自然科学基金(39970275)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 250-253 )
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