含热休克蛋白70和绿色荧光蛋白双顺反子慢病毒载体的构建与鉴定
常德1
李开龙2
潘春晓2
郭英华1
刘长庭1
1.解放军总医院南楼呼吸科,北京,1008532.北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所病理系
摘要：目的 构建并鉴定人热休克蛋白70(Hsp70)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子慢病毒表达载体,以探索Hsp70对细胞保护作用的影响.方法 通过基因重组技术将人Hsp70连接到含EGFP的慢病毒载体中,包装并收集病毒,感染人胰腺癌细胞系Aspc-1细胞后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,同时利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Westemblot)技术检测Hsp70基因的表达情况.结果 酶切和测序鉴定Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体构建正确,包装病毒感染细胞后荧光显微镜观察到细胞发绿色荧光,RT-PCR和western blot检测均表明感染病毒后细胞Hsp70的表达量明显增加.结论 成功构建了Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体,为后续研究Hsp70的功能和作用机制奠定了一定的基础.
关键词：热休克蛋白70增强型绿色荧光蛋白应激慢病毒载体
分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：武器预研重点项目(9140A26040312JB10078)中国博士后科学基金面上项目(第五十二批)(2012M521873)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 16-19 )
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