重组泛素样特异性蛋白酶1在大肠杆菌中的表达条件优化与分离纯化
张叶明
付正豪
陈云雨
1.皖南医学院药物筛选与评价研究所, 安徽 芜湖2410002.皖南医学院药物筛选与评价研究所, 安徽 芜湖2410003.皖南医学院药物筛选与评价研究所, 安徽 芜湖241000
摘要：目的 确定重组泛素样特异性蛋白酶1(ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大肠杆菌中的最佳表达条件并进行分离纯化.方法 采用DNA重组技术,构建重组质粒Ulp1-pET-28a,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导Ulp1原核表达,并从诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度方面确定其最佳表达条件,再以亲和层析法分离纯化Ulp1.结果 SDS-PAGE分析表明,工程菌诱导温度为30℃、诱导时间为6 h、IPTG浓度为0.2 mmol/L时Ulp1表达量最高,表达量约为350 mg/L且成功进行了Ulp1的分离纯化.结论 本研究成功进行了Ulp1原核表达条件的优化与分离纯化,为Ulp1在生物工程中的酶切应用奠定了实验基础.
关键词：泛素样特异性蛋白酶1原核表达表达优化亲和层析
分类号：R33(人体生理学)
资助基金：国家自然科学基金(81703546)安徽省自然科学基金(1808085QH265)吉林省科技发展计划(20160520045JH)皖南医学院重点科研培育项目(WK2018Z05)
论文发表日期：2020-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-4,30 )
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