Rac 3通过MAGEA6/AMPKα途径抑制肺腺癌A549细胞的自噬
杜天宇
肖旭阳
锦州医科大学附属第一医院, 辽宁 锦州121000
摘要：目的 通过敲除与过表达肺腺癌A549细胞的Rac家族小GTP酶3(rac family small GTPase 3,Rac 3)基因,探讨了Rac 3对A549细胞自噬的影响及机制.方法 设计靶向人Rac 3的sgRNA,构建簇状规则间隔的短回文重复序列/簇状规则间隔的短回文重复序列蛋白9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeat/cas9,CRISPR/cas9)敲除质粒并导入A549细胞,通过T7E1酶切、碱基测序及Western Blot验证基因编辑.EBSS诱导自噬,检测LC3和SQSTM-1/p62的表达评估自噬水平,caspase3活化水平评估Rac 3对凋亡影响,黑色素瘤抗原A6(melanoma antigen A6,MAGEA6)、AMPKα、ERK1/2、AKT的表达探讨Rac 3影响A549细胞自噬的机制.结果 通过CRISPR/cas9技术成功敲除A549细胞的Rac 3基因.Rac 3敲除后诱导自噬,LC3Ⅱ/I比值上升、SQSTM-1/p62水平下降,caspase3活化水平升高,MAGEA6表达下降,AMPKα及磷酸化水平上升,Rac 3过表达上述蛋白呈相反方向变化.结论 Rac 3通过MAGEA6抑制AMPKα的表达及磷酸化水平,进而抑制肺腺癌A549细胞的自噬和凋亡.
关键词：Rac 3CRISPR/cas9自噬肺腺癌
分类号：R73.3(肿瘤学)
资助基金：辽宁省教育厅自然科学类基础项目(JYTJCZR201908)
论文发表日期：2021-06-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 5-10 )
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