肠道病毒71型3C蛋白酶原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
闫浩浩
闫干干
刘晓丽
刘志成
刘晓平
陈云雨
皖南医学院药物筛选与评价研究所,安徽 芜湖 241002
摘要：目的 原核表达肠道病毒71 型3C蛋白酶(enterovirus 71 3C protease,EV71-3Cpro)并制备其特异性多克隆抗体.方法 首先依据密码子优化原则合成EV71-3Cpro基因,将其克隆到pET-28a表达载体Nde Ⅰ和Xho Ⅰ位点间构建重组质粒,再以冷CaCl2法将其转化到大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,优化原核表达条件.以HisTrapTM亲和层析柱进行分离纯化,以纯化的EV71-3Cpro作为抗原免疫大鼠,分离血清后以酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)、蛋白质印迹法(western blotting,WB)鉴定多克隆抗体的效价及其特异性.结果 ELISA和WB结果显示制备的大鼠抗EV71-3Cpro多克隆抗体效价达1 : 1024000,且具有较好的特异性.结论 抗EV71-3Cpro多克隆抗体的成功制备为EV71-3Cpro生物学功能的研究及其联合疫苗的开发奠定了实验基础.
关键词：肠道病毒71型3C蛋白酶原核表达多克隆抗体
分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81703546)安徽省自然科学基金(1808085QH265)安徽省高等学校自然科学研究项目(KJ2021A0839,YJS20210549)安徽省省级研究生创新项目(2022XSCX129)
论文发表日期：2023-06-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 17-23 )
英文信息