Sau MurA的表征及依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌的抑制作用
李明华1
马郁芳2
1.锦州医科大学, 辽宁 锦州 121000;大连医科大学, 辽宁 大连 1160442.大连医科大学, 辽宁 大连 116044
摘要：目的 对金黄色葡萄球菌UDP-N-乙酰葡糖胺烯醇丙酮转移酶(Staphylococcus aureus UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase,Sau MurA)酶学特性和活性位点进行表征,探究依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌的抑制作用.方法 构建Sau MurA表达系统,利用亲和层析方法纯化MurA蛋白,通过孔雀石绿检测法对其活性进行鉴定,并对其酶学特性进行分析;利用定点突变方法对MurA的6 个特定氨基酸位点进行突变,构建突变蛋白表达体系,确定MurA活性位点.利用依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌及其成熟生物膜进行处理,探究依布硒啉的抑制作用.结果 确定了Sau MurA具有UDP-N-乙酰葡糖胺烯醇丙酮转移酶活性,在 37℃和pH=7.5 时表现出最大活性.UDP-N-乙酰葡萄糖胺(UDP-N-Acetyl-glucosamine enolpyruvyl transferase,UNAG)的 Km 为(0.238±0.043)mM,磷酸烯醇式丙酮酸(phos-phoenolpyruvate,PEP)的Km为(0.531±0.046)mM.6 个Sau MurA突变蛋白均无活性.依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,半抑制浓度(IC50)和最小抑制浓度(MIC)分别是 4.9 μM,4.28 μg/mL.当药物浓度为 4×MIC,明显抑制细菌的生长.对于成熟生物膜的抑制作用,16×MIC依布硒啉的抑制率约为 80%,相同浓度下的利福平抑制率约为40%.结论 Sau MurA在37℃和pH=7.5 时表现出最大活性,具有较低的底物亲和力.确定K22,N23,C119,R124,D308,R400 是Sau MurA重要的活性位点.依布硒啉抑制Sau MurA的活性和金黄色葡萄球菌的生长,并有效地去除金黄色葡萄球菌的成熟生物膜.
关键词：金黄色葡萄球菌MurAUDP-N-乙酰氨基葡萄糖烯醇丙酮转移酶依布硒啉生物膜
分类号：Q936(微生物生物化学)
论文发表日期：2023-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 13-19 )
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