一种高效扩增血清松弛环状乙型肝炎病毒DNA全长基因组方法的研究
张纯瑜1
金维荣2
董辉2
1.解放军第180医院南京军区临床肝病中心, 福建泉州,3620002.201203 上海，上海人类基因组研究中心，上海市疾病与健康基因组学重点实验室
摘要：目的：建立基于滚环复制的、高效扩增血清松弛环状乙型肝炎病毒DNA（HBV RC-DNA）全长基因组的方法。方法以60例慢性乙型肝炎患者血清HBV RC-DNA为研究对象，利用T4 DNA polymerase和T4 DNA ligase，封闭HBV RC-DNA基因组上的缺口，使之成为闭合环状结构；再通过Phi29 DNA polymerase的作用，对闭合环状的HBV基因组进行滚环复制，以滚环复制后的RC-DNA为模板扩增HBV全长基因组。结果成功建立了基于滚环复制的HBV RC-DNA全长基因组扩增方法，可从病毒载量为108~104拷贝/ml样本中扩增出HBV全长基因组。对于107~105拷贝/ml血清样本来说，使用基于RC-DNA滚环复制的全长基因组扩增方法，与以往的一步法扩增相比，扩增效率显著提高。结论基于滚环复制的HBV RC-DNA全长基因组扩增方法具有较高的灵敏度。该方法的建立为H BV全基因组研究提供了一种新的、有效的工具，有望在基础和临床研究中广泛应用。
关键词：松弛环状乙型肝炎病毒DNA全长基因组扩增滚环复制
分类号：R512.6+2(传染病)
资助基金：国家科技重大专项(2013ZX10004104)国家自然科学基金(91331107)上海市科委基础研究项目(12ZR1421200)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 147-150 )
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