蛋白结合类尿毒症毒素蛋白结合率方法测定

任真真; 伦立德

摘要：目的建立蛋白结合类尿毒症毒素蛋白结合率的检测方法,测定慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血清马尿酸(hippuric acid,HA)、硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)、硫酸对甲酚(p-cresyl sulfate,PCS)及3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furan-propionic acid,CMPF)4种蛋白结合类尿毒症毒素的蛋白结合率.方法通过对方法的专属性、线性关系、精密度等考察,验证超滤法联合高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatagraphy-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定蛋白结合类尿毒症毒素的游离浓度的可行性,并采用该方法测定CKD患者血清HA、IS、PCS、CMPF的蛋白结合率.结果内源性干扰物质在待测物的出峰位置基本不干扰HA、IS、PCS、CMPF的测定;本方法在10～1 000 ng/ml (IS、PCS、CMPF)、50～5 000 ng/ml (HA)范围内线性良好;日内精密度为0.84％,日间精密度为l18％;超滤膜回收率均＞95％;健康对照组HA、IS、PCS及CMPF的蛋白结合率为(83.44±3.04)％、(98.73土0.55)％、(98.42土0.95)％、(96.66士2.65)％;CKD 3～5期HA、IS、PCS及CMPF的蛋白结合率依次为3期(79.72±3.82)％、(99.18±0.45)％、(98.64±0.64)％、(95.89±3.52)％;4期(71.09±7.66)％、(98.24±0.95)％、(98.26±0.73)％、(91.82土5.10)％;5期(61.22±7.62)％、(97.41±1.10)％、(96.85±1.51)％、(97.51±1.52)％.结论所建立的方法灵敏度高,专属性和重复性好,操作简单,能够满足定量分析测试要求.HA蛋白结合率均＞60％,与HSA之间具有中等强度结合,IS、PCS及CMPF的蛋白结合率均＞90％,与HSA之间具有高强度结合.