基于外切酶驱动策略构建荧光减弱式T4 PNK免标记传感器
刘业玲
袁珲
刘炳鑫
黄圣荣
周冰倩
李霞
薛庆旺
聊城大学 化学化工学院,山东 聊城 252059
摘要：T4多核苷酸激酶(T4 polynucleotide kinase,T4 PNK))是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化.核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关.因此构建一种灵敏的T4 PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义.本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4 PNK活性的策略,拟利用T4 PNK可将DNA的5′端由羟基化变为磷酸化的特点,磷酸化DNA能被λ核酸外切酶(λ-exonuclease)特异性识别和切割的特点降解底物双链DNA,导致与荧光染料SGΙ键合位点急剧减少,荧光信号输出由"on"模式切换到"off"模式,荧光强度大大减少.因此,可利用荧光减弱的程度来实现对T4 PNK的免标记荧光定量检测.
关键词：T4多核苷酸激酶外切酶驱动免标记荧光
分类号：O656(分析化学)
资助基金：国家自然科学基金(21675072)
论文发表日期：2022-04-28
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 82-88 )
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