鸭嘴海豆芽MyD88基因克隆和鉴定
毛旭娜
李军
聊城大学 药学院,山东 聊城 252059
摘要：髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是Toll样受体(Toll-like receptor)信号通路重要的上游接头分子.为丰富MyD88基因的系统进化数据,以原口动物鸭嘴海豆芽(Lingula anati-na)为研究对象,克隆laMyD88基因全长序列进行序列鉴定和进化分析,构建相关真核表达载体,通过细胞内荧光定位分析和报告基因实验验证laMyD88在细胞中的定位及其功能.除此以外,分离鸭嘴海豆芽的不同组织,以及对鸭嘴海豆芽进行了细菌挑战试验,提取总RNA,通过实时荧光定量PCR对laMyD88基因的组织表达谱和感染后急性期表达谱进行分析.成功克隆了鸭嘴海豆芽全长1695 bp的laMyD88 cDNA序列,其开放阅读框(open reading frame,ORF)1320 bp,编码一个含439 aa的laMyD88蛋白.所构建的真核表达载体pDesRed-laMyD88在HeLa细胞中成功表达,细胞内定位特征同文昌鱼文献报道的一致,并且在HEK293T细胞中能剂量依赖性地激活NF-κB信号通路,表达谱分析表明laMyD88基因在免疫相关组织表达量较高,并在细菌感染急性期上调表达.结果表明:laMyD88在鸭嘴海豆芽的天然免疫应答过程中发挥着重要作用.研究可以为天然免疫信号通路的起源与进化研究提供比较数据.
关键词：鸭嘴海豆芽髓样分化因子88样受体免疫反应进化
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(81402512)国家自然科学基金(31401217)山东省研究生教育创新计划项目(SDYY14016)山东省研究生教育质量提升计划项目(SDYKC18097)
论文发表日期：2022-10-28
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 64-71,110 )
英文信息