铜离子对光合颤绿菌蓝铜蛋白结晶的影响
鞠金鑫
马林
李琳
董士尚
秦晓春
济南大学生物科学与技术学院,山东济南 250022
摘要：蓝铜蛋白(auracyanin,AC)是一种含铜的重要光合电子传递载体.分别获得高质量的光合颤绿菌(Candidatus Viridilinea mediisalina,Cvm)野生型AC蛋白(Cvm-AC)和不结合铜离子的突变体AC蛋白(Cvm-AC-mutant),通过对比两者结晶条件的差异探讨铜离子对Cvm-AC蛋白结晶的影响.首先通过异源表达获得两种目的蛋白,再分别依次通过镍离子亲和层析、阴离子交换柱层析和凝胶过滤层析分离纯化获得高纯度的Cvm-AC和Cvm-AC-mutant蛋白,并使用十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白的均一性和纯度进行检测;通过使用坐滴法和悬滴法对Cvm-AC蛋白的结晶条件进行筛选和优化,最终获得了质量较好的Cvm-AC蛋白晶体.然而,使用Cvm-AC蛋白的结晶条件无法获得Cvm-AC-mutant的蛋白质晶体,表明铜离子的结合与否可以直接影响Cvm-AC的结晶.
关键词：光合颤绿菌Cvm-AC蛋白分离纯化结晶
分类号：Q936(微生物生物化学)
资助基金：国家自然科学基金(32070267)国家自然科学基金(32270260)山东省自然科学基金重大基础研究项目(ZR2019ZD48)国家自然科学基金(32200206)山东省自然科学基金(ZR2020QC057)
论文发表日期：2025-04-27
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 299-306 )
英文信息