苹果GT1家族A组中8个糖基转移酶基因克隆及蛋白表达
马迎新
商金海
于薏珊
刘倩
张新莹
冀芦沙
李攀
聊城大学药学与食品工程学院,山东聊城 252059
摘要：糖基转移酶(Glycosyltransferase,GT)是一类可糖基化修饰小分子化合物的酶类,可改变受体分子的水溶性、抗逆性等生物学功能.为探究候选糖基转移酶基因的组织表达模式,qRT-PCR检测GT1家族A组中8个糖基转移酶基因在苹果植株不同部位的基因表达水平.结果发现,7个糖基转移酶基因MdUGT91AJ1、MdUGT91AJ3、MdUGT91AJ4、MdUGT91AJ5、MdUGT91AJ6、MdUGT91AJ7 和MdUGT91 C7在不同组织部位中均有表达,差异较小,而MdUGT91AJ2差异较大.为了异源表达候选糖基转移酶的蛋白,以苹果'嘎拉'(Malus domestica Gala)cDNA为模板成功克隆了这8个基因,分别将其连接到原核表达载体pGEX-2T中,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21中.经过诱导条件探索,发现不同糖基转移酶的最佳诱导条件如下:MdUGT91AJ1、MdUGT91AJ2、MdUGT91AJ3为20 ℃,1.0 mmol·L-1 IPTG 诱导,培养 16 h;MdUGT91AJ4、MdUGT91AJ5、MdUGT91AJ6、MdUGT91AJ7 为 16℃,0.5 mmol·L-1 IPTG 诱导,培养 24 h;糖基转移酶 MdUGT91C7 为 20 ℃,0.75 mmol·L-1 IPTG 诱导,培养24 h.总之,本研究检测了 GT1家族A组中8个糖基转移酶基因在苹果植株不同部位的基因表达水平,成功构建了其原核表达载体,经诱导纯化后获得了它们的酶蛋白,为下一步糖基转移酶糖基化修饰功能鉴定奠定了基础.
关键词：苹果糖基转移酶基因克隆蛋白表达
分类号：S661.1(果树园艺)Q943.2(植物细胞遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(32001982)山东省自然科学基金(ZR2021MC062)
论文发表日期：2025-04-27
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 307-316 )
英文信息