基于RPA-CRISPR/Cas12a的支原体检测技术在生物药生产中的应用探索
高天宇1
郭清城2
潘志远1
朱湋帆1
庄煌圳1
任雨乐1
陈一1
郭梦慧1
刘涛3
王晨光2
冀芦沙4
钱卫珠4
侯盛4
李军4
孙梓乔4
王学堃5
徐进4
张大鹏4
郭怀祖5
1.聊城大学 药学与食品工程学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 2012032.聊城大学 药学与食品工程学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 325035;泰州迈博太科药业有限公司,江苏 泰州 2253163.聊城大学 药学与食品工程学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 325035;复旦大学 华山医院肿瘤科,上海 2000404.聊城大学 药学与食品工程学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 3250355.聊城大学 药学与食品工程学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院、大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 325035;张江生物技术有限公司 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,上海 201203
摘要：支原体污染是生物药生产中的重大风险源,严重威胁抗体药物等生物制品的安全性和有效性.传统检测方法因耗时长、灵敏度不足或操作繁琐,难以满足生物制药全流程快速质控的需求.针对这一挑战,本研究基于前期开发的RPA-CRISPR/Cas12a支原体检测技术,进一步拓展了其多场景中应用潜力,并评估了体系的实用性与可靠性.通过预混CRISPR体系优化显著提升操作便捷性,验证其在4℃条件下稳定保存7天且性能无显著衰减,为现场检测提供技术保障.半定量分析实现支原体的快速定量评估.应用测试覆盖生物制药工艺全流程:在上游工艺中,系统可于CHO细胞培养的早期污染预警;在下游纯化步骤,可以进行多步骤污染去除能力监测,突显其高灵敏度优势.此外,该方法还可应用于细胞库、培养基及血清的支原体检测,并在模拟污染实验中展现高可靠性.研究表明,RPA-CRISPR/Cas12a系统兼具快速、灵敏、操作简便及多场景适用性,为生物制药生产中支原体污染过程监测提供了创新解决方案,显著提升了质量控制效率与产品安全性,具有广阔的应用前景.
关键词：支原体RPA-CRISPR/Cas12a过程分析技术(PAT)生物制药过程监测
分类号：TQ464(制药化学工业)
资助基金：国家自然科学基金(22304067)上海东方英才项目(CYQN2023031)山东省自然科学基金(ZR2023QB257)山东省自然科学基金(ZR2023QB196)山东省高等学校青创团队计划(2022KJ111)光岳青年学者创新团队项目(LCUGYTD2022-04)
论文发表日期：2026-06-25
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：11( 447-456,474 )
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