细胞状态对抗RANKL抗体报告基因法活性检测的影响及方法优化
朱湋帆1
袁海燕2
侯盛3
郭清城4
徐进3
张大鹏3
李军3
庄煌圳1
任雨乐1
高天宇1
潘志远1
陈一1
郭梦慧1
钱卫珠3
郭怀祖5
1.聊城大学 药学与食品工程学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 2012032.国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 2012033.聊城大学 药学与食品工程学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 3250354.聊城大学 药学与食品工程学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 325035;泰州迈博太科药业有限公司,江苏 泰州 2253165.聊城大学 药学与食品工程学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,山东 聊城 252059;国家药品监督管理局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203;温州医科大学 药学院 大分子药物与规模化制备全国重点实验室,浙江 温州 325035;张江生物技术有限公司大分子药物与规模化制备全国重点实验室,上海 201203
摘要：报告基因法在抗核因子κB受体活化因子配体(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa-B Lig-and,RANKL)抗体(如地舒单抗)生物学活性检测中具有高灵敏度和操作便捷性,但实验常出现剂量-反应曲线拐点阶跃突变(Z型)现象,影响数据可靠性.本研究通过系统分析血清来源、消化时间、pH值等变量,首次揭示稳定表达NF-κB响应元件-荧光素酶的Raw264.7细胞状态是导致非典型Z型拐点的关键因素.实验表明,贴壁培养或胰蛋白酶消化可能改变细胞分化状态,影响信号通路的动态响应,进而引发拐点突变;而采用悬浮状态细胞可消除该现象,优化后曲线恢复典型S型平滑过渡.进一步验证实验显示,优化方法显著提升实验重复性与稳定性.本研究首次明确了稳定表达NF-κB响应元件-荧光素酶的Raw264.7细胞状态对抗RANKL抗体检测体系的关键影响,提出了基于细胞状态控制的方法优化策略,为抗RANKL抗体活性检测的精准化及实验设计优化提供了理论依据与实践方案.
关键词：报告基因法细胞状态生物活性抗RANKL抗体方法优化
分类号：R927.1(药典、药方集（处方集）、药物鉴定)
资助基金：国家自然科学基金(22304067)上海东方英才项目(CYQN2023031)山东省自然科学基金(ZR2023QB257)山东省自然科学基金(ZR2023QB196)山东省高等学校青创团队计划(2022KJ111)光岳青年学者创新团队项目(LCUGYTD2022-04)
论文发表日期：2026-06-25
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 457-463 )
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