人STAT3基因siRNA真核表达质粒的构建及鉴定
赵环宇1
张维铭2
陈锦飞1
1.南京医科大学附属南京第一医院肿瘤科,南京,2100292.天津医科大学实验中心分子生物中心,300070
摘要：目的:构建针对人STAT3基因的siRNA真核表达质粒,检测其在细胞水平对STAT3基因表达的抑制效果.方法:用DNA重组技术将针对人STAT3基因mRNA序列不同位点设计的3个siRNA序列克隆到真核表达质粒pRNAT-U6.1/neo中构建重组体pRNAT-U6.1-siRNA,重组质粒经PCR检测及测序分析,用脂质体转染重组质粒至人食管癌Eca-109细胞,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR和Western blot检测STAT3基因mRNA和蛋白的表达,筛选最佳沉默效率的siRNA.结果:PCR检测及测序分析结果均提示重组质粒构建正确.RT-PCR和Western blot检测证实pRNAT-U6.1-siRNA3具有最佳的沉默效率.结论:成功构建人STAT3基因siRNA真核表达质粒,并证实其能够从mRNA和蛋白水平抑制STAT3基因的表达.
关键词：STAT3RNA干扰食管癌细胞
分类号：R735.1(消化系肿瘤)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 974-979 )
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