稳定干扰αv整合素表达的HT-29细胞系的建立
何建明
江恒
庞学利
肖红
陈克力
胡绍毅
黄海辉
梁后杰
1.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000382.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000383.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000384.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000385.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000386.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000387.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,4000388.第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆,400038
摘要：目的 探讨逆转录病毒介导RNA干扰(RNAi)稳定抑制αv整合素表达的有效性,并建立稳定抑制αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系.方法 设计并合成3对针对αv整合素基因的短发夹RNA(shRNA)序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT-29;G418筛选,局部消化法挑选阳性克隆;Western blotting检测蛋白表达水平.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被HindⅢ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800 bp片段.测序结果显示,针对αv整合素基因的3对shRNA序列皆成功插入逆转录病毒质粒;转染逆转录病毒载体的HT-29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blotting结果显示逆转录病毒介导的shRNA能有效地抑制αv整合素表达.结论 逆转录病毒介导的shRNA能够高效、稳定地抑制αv整合素表达,进而可以建立稳定干扰αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系.
关键词：结肠癌整合素逆转录病毒RNAi
分类号：R735.3(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81000990)重庆市自然科学基金(CSTC2009,BB5339)第三军医大学青年创新人才基金(2009XQN32)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 289-293 )
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