肽核酸钳制PCR技术在结肠癌K-Ras基因突变检测中的优化
刘晓静1
徐建明1
宋三泰1
师明磊2
张彦2
王洋2
1.100071,北京 军事医学科学院附属医院消化道肿瘤内科2.100071,军事医学科学院生物工程研究所
摘要：目的 优化建立一种敏感、简便、稳定地检测结肠癌患者K-Ras基因突变的方法.方法 构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型及突变型质粒,通过优化PCR及肽核酸与特异性引物的浓度关系,达到有效模板浓度低的样品K-Ras基因突变的检测.结果 成功构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型和突变型质粒.肽核酸钳制PCR条件优化包括:(1)最佳复性温度为58℃和60℃；(2)有效模板浓度为10-6pg/μl；(3)引物浓度与肽核酸浓度的最佳比例为20∶1.在K-Ras突变型质粒与野生型质粒浓度比为1∶100时即可检测到突变.结论 肽核酸钳制PCR技术较传统的测序方法更为敏感,可以应用于有效模板浓度低的样品,为结肠癌个体化治疗前相关基因检测的有效方法.
关键词：肽核酸结肠癌K-Ras基因西妥昔单抗个体化治疗
分类号：R735.3(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81172280)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 97-101 )
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