新型人上皮性卵巢癌细胞HO8910靶向输送系统的构建及其生物学活性的鉴定
廖花
康佳丽
蒋文燕
王小霞
钟嘉莉
周聪
1.510180,广州 广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科2.510180,广州 广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科3.510180,广州 广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科4.510180,广州 广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科5.510180,广州 广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科6.510180,广州 广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科
摘要：目的构建新型人卵巢癌HO8910细胞株靶向输送系统TAT-OSBP-EGFP ，并对其靶向输送特性和体外活性进行研究鉴定。方法采用PGEX-6P-3质粒分别构建TAT-EGFP、OSBP-EGFP 和TAT-OSBP-EGFP 表达载体，重组质粒转化BL21（ DE3）大肠杆菌，经IPTG诱导表达和GST SefinoseTM Resin柱亲和层析纯化后，采用SDS-PAGE 和Western blotting 鉴定。流式细胞术分析不同浓度（0、1、5、10μmol/L） TAT-EGFP、OSBP-EGFP和TAT-OSBP-EGFP融合蛋白处理HO8910细胞2h后的细胞穿膜率，细胞免疫荧光法检测3种融合蛋白对HO8910的输送特性（以人结肠癌LoVo细胞作对比），CCK-8法检测0、1、5、10、15、40、60、80、100μmol/L TAT-OSBP-EGFP处理HO8910细胞2h后的细胞活性。结果成功构建TAT-OSBP-EGFP原核表达载体，并获得可溶性融合蛋白。与TAT-EGFP相比，当浓度为10μmol/L时，TAT-OSBP-EGFP处理后HO8910细胞的穿膜率无明显升高（ P＞0．05）；但当浓度为1、5μmol/L时，TAT-OSBP-EGFP处理后HO8910细胞的穿膜率升高，差异有统计学意义（ P＜0．01）。经TAT-OSBP-EGFP蛋白处理，HO8910细胞内荧光强度高于LoVo细胞；经TAT-EGFP蛋白处理，HO8910细胞内绿色荧光强度与LoVo细胞相似；经OSBP-EGFP 蛋白处理，两种细胞内未见明显的绿色荧光。不同浓度 TAT-OSBP-EGEP 对HO8910细胞活性无影响（ P＞0．05）。结论成功构建针对人卵巢癌HO8910细胞株的靶向输送系统，为下一步肿瘤靶向药物输送载体的构建并发挥肿瘤的靶向杀灭作用打下了良好的基础。
关键词：TAT-OSBP-EGFP融合蛋白卵巢癌靶向输送系统
分类号：R737.31(泌尿生殖器肿瘤)R392-33(医学免疫学)
资助基金：广东省自然科学基金资助项目(S2012010009341)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 865-870 )
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