miR-125a表达对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响分析

金国贤; 孙伟娟; 程程; 刘莹

摘要：目的：探讨microRNA?125a（ miR?125a）对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR（ qPCR）法检测人肝癌HepG2细胞及人正常肝细胞7702中的miR?125a水平，同时采用真核表达载体pGenesil?1质粒制备过表达miR?125a的重组质粒pGenesil?miR?125a及表达随机序列的阴性对照pGenesil?NC，根据实验设计将HepG2细胞分为3组：空白对照组、阴性对照组和过表达组，其中空白对照组未进行转染，阴性对照组和过表达组分别成功转染pGenesil?NC和pGenesil?miR?125a，待3组转染24、48、72及96 h后采用qPCR法检测各组的miR?125a水平，噻唑盐比色法检测各组转染24、48、72及96 h的细胞增殖率，分别采用Hoechst染色和流式细胞术检测转染24、48 h后的凋亡指数和caspase?3活化率来评价凋亡情况，流式细胞仪Annexin V?FITC／PI双染流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞周期，同时采用免疫印迹法检测转染48 h后对凋亡相关基因（ Bcl?2、Bax和Cleaved caspase?3）表达的影响。结果 HepG2细胞中miR?125a水平为（0?24±0?06），低于正常肝细胞7702细胞（P＜0?05）；与阴性表达组相比，过表达组转染24、48、72及96 h的miR?125a水平升高，增殖率降低，差异有统计学意义（ P＜0?05）；与其余两组相比，过表达组转染后的凋亡指数、caspase?3活化率、G0／G1期细胞比例及Bax和Cleaved caspase?3水平均升高，S和G2／M期细胞比例及Bcl?2水平均降低，以上差异有统计学意义（ P＜0?05）。结论肝癌HepG2细胞中miR?125a低表达，且过表达miR?125a可抑制增殖、诱导凋亡及G0／G1期细胞阻滞，在肝癌的发生发展中可能起到抑癌基因的作用。