miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

王晓先; 孔凡君; 李飞; 张硕

摘要：目的：探讨miR?490?3p在阿霉素（ ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF?7／ADM中的表达情况及其对MCF?7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法以野生型人乳腺癌细胞系MCF?7及其耐药型细胞系MCF?7／ADM为研究对象，用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR?490?3p的表达水平，将miR?490?3p的过表达载体pcDNA3?1（＋）?miR?490?3p瞬时转染至MCF?7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果，同时设pcDNA3?1（－）空载体对照组和空白对照组；采用MTT法测定转染pcDNA3?1（＋）?miR?490?3p对各组MCF?7／ADM细胞增殖能力的影响，测定ADM对MCF?7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（ IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化；分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组 MCF?7／ADM 细胞的凋亡率， Western blotting 检测耐药蛋白 P?糖蛋白（ P?gp ），乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达，荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度，流式细胞仪检测P?gp活性。结果MCF?7／ADM细胞中miR?490?3p的表达水平为0?24±0?07，显著低于野生型MCF?7细胞的1?02±0?03（P＜0?05）；过表达组瞬时转染24～96 h的miR?490?3p水平持续升高，均高于空载体对照组和空白对照组（ P＜0?05）；过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加，转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17?52±1?87）％、（31?67±2?79）％、（45?09±1?88）％和（61?82±2?52）％，高于空载体对照组（P＜0?05）；ADM对过表达组的IC50值为（11?27±2?34）μg／ml，低于空白对照组的和空载体对照组（ P＜0?05），且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3?35倍和3?39倍；与其余两组相比，过表达组的MCF?7／ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高，P?gp、BCRP和MRP1表达及P?gp活性均降低，差异均有统计学意义（ P＜0?05）。结论上调miR?490?3p可逆转MCF?7／ADM细胞对ADM的耐药性，可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P?gp活性有关，且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。