shRNA靶向沉默P2X7R表达对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt和Wnt／β-catenin通路的影响?
翁友良1
邹爱芳1
李跃明2
李超3
王家强3
邱素芳1
1.350014,福州 福建医科大学教学医院 福建省肿瘤医院放疗科2.350014,福建医科大学附属第一医院放射科3.350014,福建医科大学省立临床学院
摘要：目的：探讨靶向P2X7受体（ P2X7R）的小发夹RNA（ shRNA）对人鼻咽癌HONE1细胞增殖、凋亡及信号通路的影响。方法根据预实验结果优化shRNA转染条件，将2条靶向抑制P2X7R基因的shRNA载体片段（ shRNA?1、shRNA?2）分别高效转染HONE1细胞，同时设转染无义序列（ Blank）的空转染组及不进行任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时荧光定量PCR（ QPCR）检测P2X7R表达水平以筛选抑制率高的转染载体用于后续试验。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率，流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡率，QPCR法检测各组凋亡相关基因的mRNA水平，Western blotting检测各组转染96 h后磷脂酰肌醇3?激酶／蛋白激酶B（ PI3K／Akt）通路和Wnt／β?连接素（β?catenin）通路中的蛋白变化。结果转染组的P2X7R mRNA水平均低于空转染组和对照组（ P＜0?05），且选择干扰效率高的shRNA?1载体进行功能学研究；与空转染组和对照组比较，shRNA?1转染组的HONE1细胞增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bid、Bax的mRNA水平均升高，而抗凋亡基因Bcl?2、Mcl?1的mRNA水平均降低，差异有统计学意义（ P＜0?05）；与对照组比较，shRNA?1转染组处理后PI3K／Akt通路中PTEN蛋白水平均升高，而p?Akt水平均降低（ P＜0?05），Wnt／β?catenin通路中p?β?catenin、Cyclin D1和C?myc水平均降低（ P＜0?05）。结论通过shRNA抑制P2X7R基因表达可抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡，可能与抑制PI3K／Akt、Wnt／β?catenin通路有关，对鼻咽癌的防治有一定价值。
关键词：小发夹RNAP2X7受体鼻咽癌增殖凋亡
分类号：R739.6(耳鼻咽喉肿瘤)
资助基金：福建省自然科学基金(2015J01436)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 769-774 )
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