核因子蛋白90敲减对肝癌细胞增殖影响及机制的研究
宋丹1
魏莉2
吴家雪1
1.200438,上海 复旦大学生命科学学院2.266071,解放军401医院肿瘤科
摘要：目的 探究核因子蛋白90(NF90)敲减对肝癌细胞增殖影响并探讨其可能机制.方法 将靶向NF90的寡核苷酸链克隆至PLKO质粒后,包装出靶向敲减NF90的慢病毒shRNA(带有绿色荧光标签及G418抗性).将肝癌细胞QGY-7703、SMMC-7721分为对照组及干扰组,分别感染包含随机序列shRNA和靶向NF90 shRNA的病毒液.48 h后流式分选出带有绿色荧光的阳性细胞,G418筛选阳性单克隆细胞株,Western blotting鉴定NF90的蛋白表达水平,最终在对照组中选取一株细胞命名shRNA-ns,在干扰组中选取NF90敲减效果良好且稳定的两株细胞命名为shRNA-1、shRNA-2.采用CCK-8法检测各株细胞的增殖情况,克隆形成试验分析各株细胞的克隆形成能力.质谱分析预测NF90的相关结合蛋白,内、外源免疫共沉淀确定NF90与多聚ADP核糖合成酶(PARP1)的关系,荧光定位分析NF90与PARP1在细胞内的定位情况.结果 shRNA-1、shRNA-2细胞中的NF90表达水平显著低于shRNA-ns细胞,表明包装的慢病毒敲减NF90效果良好.与shRNA-ns细胞比较,shRNA-1、shRNA-2细胞的生长缓慢,克隆形成数减少,差异均有统计学意义(P<0.01).NF90与PARP1在细胞内相互结合并且共定位于细胞核.结论 敲减NF90可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与PARP1相互作用有关.
关键词：肝细胞癌核因子蛋白90多聚ADP核糖合成酶细胞增殖
分类号：R735.7(消化系肿瘤)
资助基金：山东省医药卫生科技发展计划(2016WS0731)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 385-390 )
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